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本试剂盒专用于从血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA。本制品回收率极高，尤其适合于整合到临床RT-PCR检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量样品。

• 回收率高，可以达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
  
• 灵敏度高，通过PCR检测到的最终灵敏度可以达到50～100拷贝/ml。
  
• 一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
  
• 安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
  
• 处理量大，如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。

• 自备材料：小型高速离心机、离心管、异丙醇、70%乙醇等。
  
• 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
  
• 用于制备血浆的全血在2～25℃放置的时间不能超过6小时，在此时间内，可以室温800～1600g离心20分钟，上清即为血浆。血浆可以在2～8℃或更低温度下运输，可以在室温放置一天，2～8℃放置5天，-20℃以下长期保存。血浆最好按0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。

• 每管（包括正负对照管）中加入0.6mL Buffer Rlysis-VG溶液（需提前融化）。
  
  • 为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。
    
  • 注意设置阳性和阴性对照。
• 快速震荡样品几秒，再短暂离心，取0.2mL液体样品加入到已经装有0.6mL Buffer Rlysis-VG溶液的离心管中。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体样品在4℃ 24000g冷冻离心60min，移弃1.3mL上清后作为样品。
  
• 在正负对照样品管中分别加正负对照样品。
  
• 室温放置10分钟。此间可以在每个管上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。
  
• 振荡数秒后加入0.7mL异丙醇，旋紧盖后振荡30sec混匀，把离心管的向心面对向转头的中央，13000～15000g室温离心至少15min。
  
• 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀。
  
  • 此时可能看不见RNA沉淀。
• 加入1.0mL 70%乙醇，振荡数秒后15000g室温离心5min。
  
  • 在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
• 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀.
  
  • 此时RNA呈膜状沉淀。
• 再短暂离心数秒，用移液器移弃残留液体（70%乙醇），否则它会影响后续反应。
  
• 加入200μL Rnase-free水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状RNA沉淀，溶液将呈混浊状，含少量不溶物。
  
  • 由于不溶沉淀物中含有RNA，所以不要离心后取上清使用，必须取混合液使用，哪怕很浑浊。
• 样品可以直接取适量用于RT-PCR，也可保存于-70℃长期保存。
  
  • 如果溶于200μL水，同时样品使用量不超过RT-PCR体系的1/2，不溶物一般不会影响RT-PCR。
    
  • 剩余样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。